CLCN2基因突变者尿液来源诱导多能干细胞的构建及定向分化神经细胞

CLCN2基因突变者尿液来源诱导多能干细胞的构建及定向分化神经细胞

目的 建立和鉴定CLCN2基因突变患者尿液来源特异诱导多能干细胞(iPSC),并初步探讨其神经分化能力.方法 收集临床上1例CLCN2基因突变患者尿液细胞,将表达重编程因子OCT4、SOX2、KLF4和SV40LT的附加型载体通过电转染导入尿液细胞,使其重编程为iPSC,并继续诱导其神经分化.通过Sanger测序、核型鉴定、免疫荧光、逆转录PCR、畸胎瘤实验及定向分化等评价干细胞和神经细胞特性.结果 电转后部分尿液细胞发生形态改变,形成边界清楚的致密细胞克隆团;这些克隆状生长的细胞可以连续传代,具有正常核型,含有CLCN2基因无义突变,表达多能干性标记且无外源基因;裸鼠体内形成三胚层畸胎瘤;体...

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Published in:新医学 Vol. 51; no. 8; pp. 581 - 589
Main Authors: 陈灼林, 刘佳, 谢冰冰, 甘周庆, 钟秀风, 彭福华
Format: Journal Article
Language:Chinese
Published: 510630 广州,中山大学附属第三医院神经内科%510060 广州,中山大学中山眼科中心国家重点实验室 2020
Subjects:
神经分化
白质脑病
诱导多能干细胞
CLCN2
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Summary:目的 建立和鉴定CLCN2基因突变患者尿液来源特异诱导多能干细胞(iPSC),并初步探讨其神经分化能力.方法 收集临床上1例CLCN2基因突变患者尿液细胞,将表达重编程因子OCT4、SOX2、KLF4和SV40LT的附加型载体通过电转染导入尿液细胞,使其重编程为iPSC,并继续诱导其神经分化.通过Sanger测序、核型鉴定、免疫荧光、逆转录PCR、畸胎瘤实验及定向分化等评价干细胞和神经细胞特性.结果 电转后部分尿液细胞发生形态改变,形成边界清楚的致密细胞克隆团;这些克隆状生长的细胞可以连续传代,具有正常核型,含有CLCN2基因无义突变,表达多能干性标记且无外源基因;裸鼠体内形成三胚层畸胎瘤;体外可定向诱导分化为神经干细胞和星形胶质细胞.结论 CLCN2基因突变患者尿液细胞可重编程为iPSC,并可体外分化为神经细胞,可为CLCN2基因突变相关疾病的研究提供重要材料.
ISSN:0253-9802
DOI:10.3969/j.issn.0253-9802.2020.08.003