抑制CD96可促进NK细胞分泌IFN-γ并减轻小鼠肺部的衣原体感染

• Published in: 南方医科大学学报 Vol. 40; no. 7; pp. 930 - 935
• Main Authors: 李静, 郑晶, 王敏达, 张艳, 江益凡, 张小凤, 郭普
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 蚌埠医学院第一附属医院 检验科,安徽 蚌埠,233004%蚌埠医学院科研中心组织移植安徽省重点实验室,安徽 蚌埠,233030%蚌埠医学院第一附属医院 中心实验室,安徽 蚌埠,233004 2020
• Subjects: CD96; NK细胞; 肺部感染; 干扰素-γ; 衣原体; 免疫调节
• ISSN: 1673-4254
• DOI: 10.12122/j.issn.1673-4254.2020.07.03

目的 通过调控CD96在C.muridarum肺炎小鼠体内的水平,探讨CD96调控NK细胞功能在衣原体肺部感染中的作用及可能机制.方法 选取雄性BALB/c小鼠45只,采用随机数字表法将小鼠分为Cm组、anti-CD96组及sham组,5只/组,进行3次独立重复实验.采用滴鼻吸入C.muridarum建立肺部感染模型,anti-CD96组:小鼠在感染基础上给予腹腔注射anti-CD96抗体(250μg/只,每3 d给药1次);Cm组:腹腔注射生理盐水;sham组:小鼠鼻吸入缓冲液.小鼠每日称重并绘制体质量曲线,造模5 d后,经颈椎脱臼法处死小鼠.采用荧光定量PCR与Western blot法检测CD96的表达;通过HE染色及病理评分评估小鼠肺炎症状;肺组织匀浆检测包涵体形成单位,评估肺部衣原体负荷;采用流式细胞术及ELISA等方法检测肺NK细胞产生IFN-γ的能力,以及NK细胞对巨噬细胞和Th1型细胞的免疫调节能力.结果 C.muridarum感染后第1、3、5天,采用磁珠分离各时间点以及Sham组小鼠肺NK细胞,结果显示NK细胞中CD96 mRNA表达显著降低(P<0.05),NK92细胞系经C.muridarum感染后6、12、24 h,CD96表达均明显下降(P<0.05);Western blot验证anti-CD96抗体可有效中和小鼠肺组织中CD96表达(P<0.05),自感染后第3天开始anti-CD96组小鼠体质量下降程度较Cm组减轻(P<0.05),肺组织病理切片结果证实,anti-CD96组小鼠肺炎减轻.与Cm组相比,anti-CD96组小鼠肺部衣原体负荷降低(P<0.05);Anti-CD96组小鼠肺组织中分泌IFN-γ的NK细胞(DX5+IFN-γ+)比例高于Cm组(P<0.05),与Cm组相比,anti-CD96组小鼠肺单个核细胞中IFN-γ的蛋白表达水平也显著升高(P<0.05).anti-CD96组与Cm组相比,NK细胞免疫调节作用也显著增强,小鼠肺脏中巨噬细胞比例增加(F4/80+,P<0.05),Th1应答增强(CD3+CD4+IFN-γ+,P<0.05).结论 抑制CD96可减轻C.muridarum感染小鼠肺炎,可能与其增强NK细胞分泌IFN-γ能力及对固有和适应性免疫的调节作用有关.