인간 대장암 세포 SW48과 RKO의 세포자멸사에 있어 의존수용체 RET9과 RET51 Transfection의 역할

• Published in: Intestinal research pp. 28 - 33
• Main Authors: 서현일, 박동일
• Format: Journal Article
• Language: Korean
• Published: 대한장연구학회 01-01-2013
• Subjects: 내과학
• ISSN: 1598-9100; 2288-1956

목적: 의존수용체는 리간드의 결합유무에 따라서 세포의 증식, 분화, 이동 또는 세포자멸사를 촉진시키는 수용체이다. 이번 연구는 인간 대장암 세포주에서 의존수용체와 그 리간드를 이용하여 세포자멸사를 조절할 수 있는지 알아보기 위해 시행하였다.
방법: 세 가지 인간 대장암 세포주에 의존수용체 RET9과 RET51을 각각 transfection시킨 후 세포자멸사를 측정하였다. 동시에 의존수용체를 transfection시킨 12시간 후 리간드인 GDNF를 100 ng/mL 농도로 투여한 군의 세포자멸사도 측정하였다. Empty vector는 pcDNA를 사용하였다. 또한 GDNF 농도에 따른 세포자멸사도 측정하였다.
결과: RET51을 transfection시켰을 경우 SW48 세포주는 empty vector인 pcDNA를 transfection시킨 군에 비해 ELISA 검사 시 1.7배, caspase검사 시 2.19배 세포자멸사가 증가하였다. RKO 세포주는 ELISA 검사시 3.55배, caspase 검사 시 2.06배 증가하였다. V400 세포주는 세포자멸사의 증가가 관찰되지 않았다. RET9은 모든 세포주에서 세포자멸사의 증가가 관찰되지 않았다. RET51 transfection 12시간 후 GDNF를 투여한 SW48 세포주에서는 ELISA 검사 시 0.75배, caspase 검사 시 0.88배 측정되었으며, RKO 세포주에서는 각각 2.18배, 0.89배 측정되었다. RKO 세포주에 RET51을 transfection시킨 후 GDNF의 농도를 각각 0, 25, 50, 100 ng/mL로 투여하였을 때, 투여한 GDNF의 농도가높을수록 세포자멸사가 감소하는 것이 관찰되었다.
결론: 인간 대장암 세포주에 인위적으로 의존수용체와 그 리간드를 조작함으로서 세포자멸사를 촉진시킬 수도, 억제시킬 수도 있다는 것을증명함으로서 새로운 대장암 치료법을 시도해 볼 수 있는 이론적 근거를 마련하였다. Background/Aims: Dependent receptor can transmit both positive signal: proliferation, differentiation or migration; and negative signal: apoptosis. It depends on the presence of its ligand. This study was performed to determine the effects of transfection of dependent receptors in human colon cancer cell lines. Methods: Two dependent receptors (rearranged during transfection [RET]9 and RET51) were transfected into three human colon cancer cell lines: SW48, RKO and V400. Then, half of them were treated with glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF). Using ELISA and caspase assay, apoptosis was measured.
Dose-response relation between GDNF and apoptosis was also analyzed. A pcDNA was used as an empty vector. Results:After transfection of RET51, apoptosis was increased in SW48 (70% with ELISA and 119% with caspase assay) and RKO (255% with ELISA and 106% with caspase assay) cell lines when compared with the pcDNA group. V400 cell line did not show increased apoptosis. Transfection of RET9 did not induce apoptosis in all of the three human colon cancer cell lines. Treatment with GDNF 12 hours after transfection of RET51 decreased apoptosis in SW48 (66% with ELISA and 60% with caspase assay) and RKO (39% with ELISA and 57% with caspase assay) when compared with the cell lines transfected with RET51 only. Apoptosis was down-regulated with increasing concentration of GDNF in RKO cell line. Conclusions: This study showed that the apoptosis of human colon cancer cell line can be controlled by manipulating the dependent receptors and its ligands. We present the possibility of therapeutic method using dependent receptor in colon cancer. (Intest Res 2013;11:28-33) KCI Citation Count: 0