Production of polyclonal antisera using recombinant coat proteins of Grapevine leafroll-associated virus 2 and Grapevine virus B

• Published in: Pesquisa agropecuaria brasileira Vol. 43; no. 10; pp. 1405 - 1411
• Main Authors: Radaelli, Paula, Fajardo, Thor Vinícius Martins, Nickel, Osmar, Eiras, Marcelo, Pio-Ribeiro, Gilvan
• Format: Journal Article
• Language: English
• Published: Embrapa Secretaria de Pesquisa e Desenvolvimento; Pesquisa Agropecuária Brasileira 01-10-2008
• Subjects: AGRICULTURE, DAIRY & ANIMAL SCIENCE; AGRICULTURE, MULTIDISCIPLINARY; Western blot; ELISA indireto; GVB; indirect ELISA; Vitis; recombinant protein; proteína recombinante; GLRaV-2
• ISSN: 0100-204X; 1678-3921; 0100-204X
• DOI: 10.1590/S0100-204X2008001000020

The objective of this work was to produce and characterize specific antisera against Brazilian isolates of Grapevine leafroll-associated virus 2 (GLRaV-2) and Grapevine virus B (GVB), developed from expressed coat proteins (CPs) in Escherichia coli, and to test their possible use for the detection of these two viruses in diseased grapevines. The coat protein (CP) genes were RT-PCR-amplified, cloned and sequenced. The CP genes were subsequently subcloned, and the recombinant plasmids were used to transform E. coli cells and express the coat proteins. The recombinant coat proteins were purified, and their identities were confirmed by SDS-PAGE and Western blot and used for rabbit immunizations. Antisera raised against these proteins were able to recognize the corresponding recombinant proteins in Western blots and to detect GLRaV-2 and GVB in infected grapevine tissues, by indirect ELISA, discriminating healthy and infected grapevines with absorbances (A405) of 0.08/1.15 and 0.12/1.30, respectively. Expressing CP genes can yield high amount of viral protein with high antigenicity, and GLRaV-2 and GVB antisera obtained in this study can allow reliable virus disease diagnosis.
O objetivo deste trabalho foi produzir e caracterizar anti-soros específicos contra isolados brasileiros do Vírus do enrolamento-da-folha da videira 2 (GLRaV-2) e do Vírus B da videira (GVB), desenvolvidos a partir das proteínas capsidiais expressas em Escherichia coli, e testar seu possível uso para a detecção destes dois vírus em videiras infectadas. Os genes da proteína capsidial (CP) foram amplificados via RT-PCR, clonados e seqüenciados. Foram, subseqüentemente, subclonados, e os plasmídeos recombinantes foram empregados na transformação das células de E. coli e na expressão das proteínas capsidiais. As proteínas capsidiais recombinantes foram purificadas, e suas identidades foram confirmadas em SDS-PAGE e "Western blot" e utilizadas para imunizar coelhos. Os anti-soros produzidos contra essas proteínas foram capazes de reconhecer as proteínas recombinantes correspondentes em "Western blot", de detectar GLRaV-2 e GVB em tecidos infectados de videiras pelo ELISA indireto, e de discriminar videiras sadias e infectadas, com absorbâncias (A405) de 0,08/1,15 e 0,12/1,30, respectivamente. A expressão dos genes CP pode produzir grandes quantidades de proteínas virais, com elevada antigenicidade, e os anti-soros de GLRaV-2 e GVB obtidos neste trabalho possibilitam a diagnose confiável desses vírus.