启动子低甲基化介导NOL9过表达促进肝癌细胞增殖

• Published in: 新医学 Vol. 54; no. 4; pp. 287 - 293
• Main Authors: 陈希瑶, 许镇, 邬喆斌, 张博翔, 彭亮, 谢婵
• Format: Journal Article
• Language: Chinese
• Published: 510630 广州, 中山大学附属第三医院感染科 2023
• Subjects: 增殖; 肝细胞癌; 核仁蛋白9; 甲基化
• ISSN: 0253-9802
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9802.2023.04.011

目的 探讨核仁蛋白9(NOL9)在肝癌中的表达和对肝癌细胞增殖的影响,进一步阐明NOL9在肝癌中表达上调的分子机制.方法 选择7例肝癌患者的手术标本(癌组织和癌旁组织),通过蛋白免疫印迹法和反转录-实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测NOL9在癌组织和癌旁组织中的表达水平;分别转染小干扰RNA(si-RNA)到肝癌Huh7和HCCLM3细胞,采用RT-qPCR、蛋白免疫印迹法、细胞集落形成实验、细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析差异;利用TCGA数据库肝癌数据评估NOL9 mRNA表达水平和启动子的甲基化水平,同时评估NOL9和DNA甲基异位擦除蛋白家族(TET1、TET2和TET3)转录水平的相关性;采用RT-qPCR和蛋白免疫印迹法检测DNA去甲基化试剂5-Aza-Dc处理后Huh7和HCCLM3细胞中NOL9表达水平的变化;5-Aza-Dc预处理后再转染si-RNA,采用细胞集落形成实验和CCK-8分析细胞增殖的差异.结果 NOL9在肝癌组织中表达上调;敲低NOL9能抑制肝癌Huh7和HCCLM3细胞增殖以及细胞集落形成(P均<0.01);肝癌中NOL9启动子甲基化与其mRNA水平呈负相关,NOL9 mRNA水平和一个CpG区域(cg07997941)呈负相关;在肝癌中,NOL9与TET1、TET2和TET3的转录水平均呈正相关;在给予5-Aza-Dc处理后,NOL9的表达上调;5-Aza-Dc的处理能逆转敲低NOL9对肝癌细胞增殖以及克隆形成的抑制作用.结论 NOL9在肝癌组织中高表达,敲低NOL9抑制了肝癌细胞的增殖和克隆形成,其上调机制可能与启动子低甲基化相关.