α7nAChR基因敲除HIV-1gp120转基因小鼠模型的构建

目的通过构建双基因编辑小鼠模型(α7R-/-/gp120+),为探索α7乙酰胆碱受体(α7nAChR)介导gp120中枢神经毒性的作用和机制提供研究基础.方法 α7 nAChR基因敲除小鼠(α7R-/-)与HIV-1 gp120转基因小鼠(gp120+)杂交(F0),从产生的F1小鼠中,选取基因型为α7R/-/gp 120+的小鼠进一步交配,得到F2小鼠.PCR法鉴定和筛选F3小鼠基因型,免疫组化分析双转基因动物模型蛋白表达;体外实验使用gp120蛋白和α7 nAChR抑制剂处理小胶质细胞,ELISA检测各组IL-1β与TNF-α-达情况.结果 F3小鼠的PCR结果符合预期,其中有2只双基因...

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Published in:	南方医科大学学报 Vol. 40; no. 8; pp. 1184 - 1191
Main Authors:	胡彤彤, 龚泽龙, 万宇, 李煜彬, 高雪锋, 伦静娴, 黄胜和, 曹虹
Format:	Journal Article
Language:	Chinese
Published:	南加州大学洛杉矶儿童医院,洛杉矶90027 2020 南方医科大学公共卫生学院∥广东省热带病研究重点实验室,微生物学系,广东广州510515%南方医科大学公共卫生学院∥广东省热带病研究重点实验室,微生物学系,广东广州510515
Subjects:	转基因基因敲除小鼠 α7烟碱型乙酰胆碱受体 HIV-1 gp120
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Summary:	目的通过构建双基因编辑小鼠模型(α7R-/-/gp120+),为探索α7乙酰胆碱受体(α7nAChR)介导gp120中枢神经毒性的作用和机制提供研究基础.方法 α7 nAChR基因敲除小鼠(α7R-/-)与HIV-1 gp120转基因小鼠(gp120+)杂交(F0),从产生的F1小鼠中,选取基因型为α7R/-/gp 120+的小鼠进一步交配,得到F2小鼠.PCR法鉴定和筛选F3小鼠基因型,免疫组化分析双转基因动物模型蛋白表达;体外实验使用gp120蛋白和α7 nAChR抑制剂处理小胶质细胞,ELISA检测各组IL-1β与TNF-α-达情况.结果 F3小鼠的PCR结果符合预期,其中有2只双基因编辑成功的小鼠.免疫组化结果显示双基因编辑小鼠(α7R-/-/gp120+)的脑组织缺乏α7 nAChR的同时高表达gp120蛋白.体外实验结果表明Gp120可促进小胶质细胞分泌IL-1β与TNF-α,而抑制α7nAChR后IL-1β与TNF-α表达明显降低(P＜0.001).结论 α7R-/-/gp120+双基因修饰小鼠成功构建,且具有稳定遗传的特点,可为后续探索α7nAChR介导gp120中枢神经毒性的作用和机制提供重要的动物模型.
ISSN:	1673-4254
DOI:	10.12122/j.issn.1673-4254.2020.08.17