Fatores Pré-Analíticos que Influenciam a Sequenciação de Nova Geração (NGS): Experiência IPO Coimbra

• Main Author: Moreira, Ana Luísa Vilas Boas Guimarães
• Format: Dissertation
• Language: Portuguese
• Published: ProQuest Dissertations & Theses 01-01-2023
• Subjects: Bioinformatics; Genes; Polymerase chain reaction
• ISBN: 9798383854402

A Sequenciação de nova geração (Next-generation sequencing(NGS)) refere-se a uma tecnologia de sequenciação de alto rendimento. O uso da NGS especificamente aplicada à caracterização de tumores sólidos, enfrenta desafios significativos devido à natureza dos tecidos disponíveis para análise. O Tecido Fixado em Formol e Impregnado em Parafina (TFFIP) é o método mais utilizado para preservar a morfologia histológica, os ácidos nucleicos e as proteínas para fins de diagnóstico. O objetivo deste trabalho foi a avaliação da influência dos fatores préanalíticos a que os tecidos estão sujeitos no Laboratório de Histologia do Instituto Português de Oncologia de Coimbra (IPOC). Os resultados deste estudo mostraram que a duração de fixação, o tipo de processamento, a área tumoral e o período de arquivo dos blocos de parafina impactam na quantidade e qualidade de ADN recuperado de TFFIP. Desta experiência conclui-se que a duração de fixação dos tecidos não deve ultrapassar os quatro dias. O processamento que menos compromete a quantidade e qualidade de ADN foi aquele em que o agente diafanizador foi o xilol e deve ser utilizada parafina com ponto de fusão que não ultrapasse os 62°C. Efetivamente, os fatores pré-analíticos devem, sem qualquer dúvida, ser bem controlados de modo a garantir que estudos moleculares posteriores não sejam comprometidos.