Regulação do Citoesqueleto nas Células do Cancro da Bexiga Após Tratamento Fotodinâmico

• Main Author: Pereira, José Carlos Ribeiro Ferreira
• Format: Dissertation
• Language: English
• Published: ProQuest Dissertations & Theses 01-01-2016
• Subjects: Aging; Cancer therapies; Macular degeneration; Oncology; Ophthalmology; Pharmaceutical sciences; Public health; Toxicity; Toxicology; Tumors; Womens health
• ISBN: 9798381369274

A terapia fotodinâmica (PDT) é uma modalidade promissora para o tratamento do cancro. Esta terapia baseia-se na interação entre um composto químico (fotossensibilizador, PS), luz com um determinado comprimento de onda e oxigénio molecular para originar a produção de espécies reativas de oxigénio (ROS). Devido à sua elevada reatividade, estas espécies tóxicas podem causar danos severos conduzindo à morte celular. Atualmente, os PS disponíveis na clínica para o tratamento de tumores apresentam baixa seletividade para as células tumorais. Estudos anteriores do nosso grupo descreveram uma porfirina conjugada com unidades dendríticas de galactose (PorGal8) como um novo PS solúvel em solução aquosa, capaz de gerar ROS após fotoativação e com reconhecimento por parte de proteínas (galectina-1) que se encontram sobreexpressas nas células do cancro da bexiga. Vários estudos têm descrito alterações no citoesqueleto em resposta ao tratamento fotodinâmico. No entanto, a contribuição da desorganização do citoesqueleto na morte celular induzida por PDT encontra-se pouco esclarecida. Neste trabalho, avaliámos de que forma alterações nos constituintes do citoesqueleto – filamentos de actina, filamentos intermédios e microtúbulos – estão relacionadas com morte celular induzida por PDT com PorGal8. O uptake de PorGal8 em duas linhas celulares do cancro da bexiga derivadas de carcinoma de células transicionais (UM-UC-3 e HT-1376), foi dependente da concentração. O uptake celular de PorGal8 foi superior nas células UM-UC-3, que exibem níveis superiores da proteína galectina-1, comparativamente com as células HT-1376. PorGal8 mostrou não ser tóxico no escuro. A fotoativação da PorGal8 resultou numa fototoxicidade significativamente superior nas células UM-UC-3 relativamente às células HT-1376. A PorGal8não induziu alterações significativas nos níveis de proteína α-tubulina nas células UM-UC-3. No entanto, observou-se uma redução significativa nos níveis de α-tubulina nas células HT-1376 vinte e quatro horas após tratamento com irradiação. Apesar de se ter observado uma recuperação na organização dos microtúbulos em algumas células, a intensidade da fluorescência diminuiu consideravelmente na maior parte das células HT-1376. Uma redução significativa nos níveis de proteína dos filamentos intermédios (vimentina) foi observada em ambas as linhas celulares vinte e quatro horas após irradiação. Trinta minutos após a irradiação, as células UM-UC-3 e HT-1376 apresentaram uma clara retração nos filamentos de actina com perda de fibras de stress. Ao contrário das células UM-UC-3 em que não se verificaram sinais de recuperação, em algumas células HT-1376 verificou-se uma certa reorganização dos filamentos de actina, com curtas fibras de stress, longas extensões, grandes filopodia, o que parece sugerir uma possível recuperação das células HT-1376. A RhoA, uma proteína da família de pequenas proteínas GTPases, descrita como estando relacionada com a expressão da galectina-1, foi adicionalmente avaliada. Resultados preliminares indicaram que a PorGal8 induziu uma tendência para aumentar os níveis de RhoA nas células HT-1376 vinte e quatro horas após tratamento com irradiação.Concluindo, os nossos resultados contribuem para o esclarecimento dos mecanismos subjacentes dos efeitos fototóxicos da PorGal8. Uma melhor compreensão dos intervenientes e das alterações induzidas imediatamente após PDT nas estruturas do citoesqueleto em cancros resistentes à terapia, poderão contribuir para o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos adjuvantes à PDT.