Három-dimenziós in vitro multicelluláris szferoidok fejlesztése és alkalmazása tumorellenes hatóanyagok vizsgálatára

• Main Author: Alföldi, Róbert
• Format: Dissertation
• Language: Hungarian
• Published: ProQuest Dissertations & Theses 01-01-2021
• Subjects: Cellular biology; Molecular biology; Oncology
• ISBN: 9798381088779

A dolgozat a során a különböző módon előállított háromdimenziós in vitro sejttenyésztési eljárásokkal kialakított multicelluláris szferoidok vizsgálatát végeztem el annak érdekében, hogy összehasonlítsam azokat a normál in vivo fiziológiás szöveti állapottal, valamint a széleskörben használt hagyományos kétdimenziós sejttenyészetekkel. Továbbá igyekeztem bemutatni a kialakított rendszereken, illetve a létrehozott szferoidokon végzett vizsgálatok eredményeit, melyek alapján négy fő megállapításra jutottunk .i. A RAFTTM alkalmazása az egér hasnyálmirigy-szigetek hosszú távú fenntartására kiváló eredményeket mutatott, mivel a szigetek integritása, speciális sejtjeinek inzulin és glükagon termelése legalább tizennyolc napig ex vivo megmaradt. A kapott eredményeink alapján a RAFTTM ígéretes eszköznek bizonyul, mivel a klinikumban nagy igény mutatkozik az olyan terápiák iránt, ahol a cukorbetegek inzulinpótlását a szervezetükbe ültetett inzulin termelő xenograft szigetekkel tudnák pótolni. Tudomásunk szerint csoportunk közleménye volt az első a hasnyálmirigy-szigetek RAFTTM 3D in vitro sikeres fenntartásáról.ii. A 624 gént vizsgáló nanokapilláris qRT-PCR, valamint a 62 gént vizsgáló 1536 qRT-PCR vizsgálatok az in vivo xenograft tumorok és a 3D A549 sejtkultúrák esetében magasabb TMEM45A, SLC16A3, CD66, SLC2A1, CA9 és CD24, valamint alacsonyabb EGFR expressziót mutattak az egyrétegű 2D tenyészetekhez képest.iii. Az alkalmazott többdimenziós egysejt fehérje profil (viSNE) kimutatta, hogy a 3D (Cytodex3 és Nutrisphere) kultúrák átmenetet jelentenek a 2D-ből az in vivo állapot felé a TRA-1-60, TMEM45A, pan-keratin, CD326, MCT4, Gal-3, CD66, GLUT1 és a CD274 kifejeződése alapján. A CA9, CD24 és az EGFR ezzel szemben magasabb kifejeződést mutatott a 3D Cytodex3 és Nutrisphere kultúrákban, mint az in vivotumorokba.iv. A humán MCF-7 és egér 4T1 emlő daganatsejteket használva igazoltuk a 2D és 3D sejtkultúrák eltérő kemorezisztenciáját. Mivel a szűrés során az újonnan szintetizált imidazo [1,2-b] pirazol-7-karboxamidok potenciális tumorellenes hatásának vizsgálata folyamán a 16 aktív kismolekulából 6 vegyület esetén minimum két és félszeres hatásbéli különbséget mértünk. Ezekben az esetekben 3D tenyészetek kevésbé voltak érzékenyek az adott szerre, beleértve a klinikumban széleskörűen használt és jól ismert doxorubicinre is. Ezzel az általunk létrehozott 3D kultúrákon is igazolva az irodalomban leírt hatás béli különbséget.