PCR CUANTITATIVA EN TIEMPO REAL PARA LA CUANTIFICACIÓN DE COPIAS DE HBB

• Published in: BAG. Journal of basic and applied genetics Vol. 33; p. 106
• Main Authors: Scheps, K G, Pepe, C, Targovnik, H M
• Format: Journal Article
• Language: Spanish
• Published: Buenos Aires Sociedad Argentina de Genetica 01-12-2022
• ISSN: 1666-0390; 1852-6233

Los síndromes β-talasémicos siguen siendo un desafío para los profesionales de la salud. Pese a que las variantes causales más frecuentes son puntuales, también hay deleciones que pueden afectar al gen HBB y a otros integrantes del cluster de β-globina. Actualmente, MLPA es la metodología más utilizada para evidenciarlas, aunque este método no es accesible para todos los laboratorios. El objetivo de este trabajo fue poner a punto un método basado en qRT-PCR y detección con un agente intercalante, para cuantificar de manera relativa, utilizando el método ΔΔCt, el número de copias de HBB y detectar deleciones. Se diseñaron primers que abarcan parte del primer exón e intrón de HBB y como referencia se amplificó B2M. Se analizaron nueve muestras con una única copia de HBB con variantes (δβ)0-siciliana o (δβ)+-Lepore tipificadas por PCR-GAP, 13 muestras controles con variantes heterocigotas en HBB y cuatro muestras incógnitas, cuyos resultados se corroboraron por MLPA (SALSA P102). Las reacciones presentaron una eficiencia de amplificación del 102,9% para HBB y 102,4% para B2M. Los valores de ΔCt target-control presentaron distribuciones normales en los distintos experimentos. El análisis de MLPA de las muestras incógnitas confirmó la presencia de deleciones que afectaron el gen HBB, mostrando coincidencia con el análisis por qRT-PCR. Se logró poner a punto un método alternativo y accesible para la detección de deleciones que afecten a HBB, logrando facilitar el diagnóstico de los síndromes β-talasémicos en nuestro medio, lo que redunda en beneficio de los pacientes afectados y sus familias.