Genetic transformation of sweet oranges with the D4E1 gene driven by the AtPP2 promoter

• Published in: Pesquisa agropecuaria brasileira Vol. 48; no. 7; pp. 741 - 747
• Main Authors: Attílio, Lísia Borges, Mourão Filho, Francisco de Assis Alves, Harakava, Ricardo, Silva, Tatiane Loureiro da, Miyata, Luzia Yuriko, Stipp, Liliane Cristina Libório, Mendes, Beatriz Madalena Januzzi
• Format: Journal Article
• Language: English
• Published: Embrapa Secretaria de Pesquisa e Desenvolvimento; Pesquisa Agropecuária Brasileira 01-07-2013; Embrapa Informação Tecnológica
• Subjects: AGRICULTURE, DAIRY & ANIMAL SCIENCE; AGRICULTURE, MULTIDISCIPLINARY; Citrus sinensis; peptídeo antimicrobiano; promotor tecido‑específico; tissue‑specific promoter; peptídeo antimicrobiano; Citrus sinensis; antimicrobial peptide; promotor tecido‑específico
• ISSN: 0100-204X; 1678-3921; 0100-204X
• DOI: 10.1590/S0100-204X2013000700006

The objective of this work was to produce transgenic 'Pêra' and 'Valência' sweet orange plants using the D4E1 gene driven by the Arabidopsis thaliana phloem protein (AtPP2) promoter and to quantify transgene expression in different transformation events. Genetic transformation experiments were carried out with epicotyl segments co‑cultivated with Agrobacterium tumefaciens. Six plants from 'Pêra' sweet orange and seven plants from 'Valência' sweet orange were confirmed as different transgenic events by means of the polymerase chain reaction (PCR) and the Southern blot techniques. Transgene expression was quantified using real‑time quantitative PCR. D4E1 gene expression levels vary from 5 up to 50 times among different transformation events.
O objetivo deste trabalho foi obter plantas transgênicas de laranja 'Pêra' e 'Valência' por meio do gene D4E1 dirigido pelo promotor Arabidopsis thaliana phloem protein (AtPP2) e quantificar a expressão dos transgenes nos diferentes eventos de transformação. Os experimentos de transformação genética foram realizados com segmentos de epicótilo cocultivados com Agrobacterium tumefaciens. Seis plantas de laranja 'Pêra' e sete plantas de laranja 'Valência' foram confirmadas como distintos eventos transgênicos por meio das técnicas de reação em cadeia da polimerase (PCR) e Southern blot. A expressão dos transgenes foi quantificada por PCR quantitativo em tempo real. Os níveis de expressão do gene D4E1 variam de 5 a 50 vezes entre os diferentes eventos de transformação.