Avaliação automatizada da infiltração e remoção celular em scaffolds descelularizados – Estudo experimental em coelhos

• Published in: Revista brasileira de ortopedia Vol. 57; no. 6; pp. 992 - 1000
• Main Authors: Santos, Alex de Lima, Silva, Camila Gonzaga da, Barreto, Leticia Siqueira de Sá, Tamaoki, Marcel Jun Sugawara, Almeida, Fernando Gonçalves de, Faloppa, Flavio
• Format: Journal Article
• Language: Portuguese
• Published: Rua do Matoso 170, Rio de Janeiro, RJ, CEP 20270-135, Brazil Thieme Revinter Publicações Ltda 01-12-2022
• Subjects: Artigo Original; medicina regenerativa; tissue engineering; tendons; matriz extracelular; regenerative medicine; tendões; engenharia tecidual; tecidos suporte; tissue scaffolds; extracellular matrix
• ISSN: 0102-3616; 1982-4378
• DOI: 10.1055/s-0041-1739174

Resumo
Objetivo
 Mensuração semiquantitativa e automatizada da remoção de material nuclear e da infiltração celular em scaffolds tendinosos descelularizados (STDs).
Método
 Foram utilizados 16 coelhos Nova Zelândia puros, sendo o tendão do músculo gastrocnêmio coletado bilateralmente de metade destes animais (16 tendões coletados); 4 foram mantidos como controle e 12 foram submetidos ao protocolo de descelularização (STD). Dos STDs, 8 foram utilizados como implante in vivo no modelo experimental de lesão do manguito rotador (LMR) e os restantes, assim como os controles, foram utilizados na avaliação semiquantitativa e automatizada da remoção de material nuclear. Os oito coelhos adicionais foram utilizados na confecção do modelo experimental de LMR e posterior avaliação da infiltração celular após 2 ou 8 semanas, dentro do STD.
Resultados
 A análise semiquantitativa e automatizada utilizada demonstrou uma remoção de 79% do material nuclear (
p
 < 0,001 e poder > 99%) e uma diminuição de 88% (
p
 < 0,001 e poder > 99%) na área ocupada por material nuclear após o protocolo de descelularização. Sobre a infiltração celular no STD, foi observado um aumento de 256% (
p
 < 0,001 e poder > 99%) no número de células dentro do STD na comparação entre 2 e 8 semanas de pós-operatório.
Conclusão
 O método de mensuração semiquantitativo e automatizado proposto foi capaz de mensurar objetivamente a remoção de material nuclear e a infiltração celular no STD.
Abstract
Objective
 Semiquantitative and automated measurement of nuclear material removal and cell infiltration in decellularized tendon scaffolds (DTSs).
Method
 16 pure New Zealand rabbits were used, and the gastrocnemius muscle tendon was collected bilaterally from half of these animals (16 tendons collected); 4 were kept as control and 12 were submitted to the decellularization protocol (DTS). Eight of the DTSs were used as an in vivo implant in the experimental rotator cuff tear (RCT) model, and the rest, as well as the controls, were used in the semiquantitative and automated evaluation of nuclear material removal. The eight additional rabbits were used to make the experimental model of RCT and subsequent evaluation of cellular infiltration after 2 or 8 weeks, within the DTS.
Results
 The semiquantitative and automated analysis used demonstrated a removal of 79% of nuclear material (
p
 < 0.001 and power > 99%) and a decrease of 88% (p < 0.001 and power >99%) in the area occupied by nuclear material after the decellularization protocol. On cell infiltration in DTS, an increase of 256% (p < 0.001 and power >99%) in the number of cells within the DTS was observed in the comparison between 2 and 8 weeks postoperatively.
Conclusion
 The proposed semiquantitative and automated measurement method was able to objectively measure the removal of nuclear material and cell infiltration in DTS.