Molekularbiologische Identifizierung von Cunninghamella spec

• Published in: Mycoses Vol. 45; no. S1; pp. 31 - 36
• Main Authors: Lemmer, Karin, Losert, Heidemarie, Rickerts, V., Just-Nübling, Gudrun, Sander, Anna, Kerkmann, Marie-Louise, Tintelnot, Kathrin
• Format: Journal Article
• Language: English
• Published: Oxford, UK Blackwell Publishing Ltd 01-09-2002
• Subjects: Cunninghamella; ITS region; PCR; PCR fingerprinting; RFLP; sequencing; Sequenzierung
• ISSN: 0933-7407; 1439-0507
• DOI: 10.1111/j.1439-0507.2002.tb04543.x

Zusammenfassung. Mit den klassischen mikrobiologischen Verfahren ist eine eindeutige Identifizierung der bislang einzigen klinisch relevanten Cunninghamella‐Art, C. bertholletiae, nicht möglich. Mittels PCR und Sequenzierung der Internal‐transcribed‐spacer‐(ITS)‐DNA‐Region konnten von neun klinischen Isolaten der Gattung Cunninghamella sieben als C. bertholletiae und zwei als C. echinulata identifiziert werden. Ein Umgebungsisolat eines mit C. echinulata infizierten Patienten konnte ebenfalls als C. echinulata identifiziert werden. Alle Isolate der Spezies C. bertholletiae zeigten eine hohe Sequenzhomologie der ITS‐Region. Innerhalb der Spezies C. echinulata und C. elegans konnte aufgrund unterschiedlicher Restriktionsfragmentlängen‐Profile nach Inkubation der ITS‐Amplifikate mit TaqI und HinfI eine Subspeziesdifferenzierung erreicht werden. Ähnliche Ergebnisse wurden auch mittels PCR fingerprinting der Gesamt‐DNA mit den Microsatellit‐DNA‐Primern (GTG)5 and (GAC)5 erhalten. Erstmalig konnte C. echinulata als Erreger einer Zygomykose beim Menschen identifiziert werden.
Summary. Among the genus Cunninghamella, so far C. bertholletiae is known to be the only clinically relevant species. Correct identification of C. bertholletiae is not possible with classical methods. PCR and sequencing of the internal transcribed spacer (ITS) region was used to identify seven of nine clinical isolates as C. bertholletiae and two as C. echinulata. Also an isolate of the surrounding area of one patient infected with C. echinulata could be identified as C. echinulata. High homology in the ITS region was found within the isolates of C. bertholletiae. Within the species C. echinulata and C. elegans a differentiation on subspecies level was achieved by an analysis of restriction fragment length polymorphism of the ITS amplicons after incubation with TaqI and HinfI. Similar results were obtained by PCR fingerprinting of the complete DNA with the single microsatellite DNA primers (GTG)5 and (GAC)5. For the first time C. echinulata could be identified as agent of zygomycosis in humans.