Immunohistochemical detection of Clostridia species in paraffin-embedded tissues of experimentally inoculated guinea pigs

Blackleg is caused by Clostridium chauvoei, whereas malignant oedema is caused by C. chauvoei, C. septicum, C. sordellii, C. perfringens type A, and/or C. novyi type A. Anti-C. chauvoei, anti-C. septicum, anti-C. sordellii and anti-C. novyi type A polyclonal antibodies were produced in rabbits and p...

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Published in:	Pesquisa veterinária brasileira Vol. 25; no. 1; pp. 4 - 8
Main Authors:	Assis, Ronnie A.(Universidade Federal de Minas Gerais Escola de Veterinária Departamento de Medicina Veterinária Preventiva), Lobato, Francisco C.F.(Universidade Federal de Minas Gerais Escola de Veterinária Departamento de Medicina Veterinária Preventiva), Serakides, Rogéria(UFMG Escola de Veterinária Departamento de Clínica e Cirurgias Veterinárias), Santos, Renato L.(UFMG Escola de Veterinária Departamento de Clínica e Cirurgias Veterinárias), Dias, Guilherme R.C.(Universidade Federal de Minas Gerais Escola de Veterinária Departamento de Medicina Veterinária Preventiva), Nascimento, Ricardo. A.P.(Laboratório Regional de Apoio Animal do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento), Abreu, Vera. L.V.(Universidade Federal de Minas Gerais Escola de Veterinária Departamento de Medicina Veterinária Preventiva), Parreiras, Patrícia M.(Fiocruz Instituto Oswaldo Cruz), Uzal, Francisco A.(University of California Davis School of Veterinary Medicine San Bernardino Branch)
Format:	Journal Article
Language:	English
Published:	Colégio Brasileiro de Patologia Animal - CBPA 01-01-2005
Subjects:	Blackleg Carbúnculo sintomático Clostridia cobaias edema maligno fluorescent antibody technique guinea pigs imunofluorescência direta malignant oedema streptavidin biotin peroxidase technique streptavidina biotina peroxidase
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Description
Summary:	Blackleg is caused by Clostridium chauvoei, whereas malignant oedema is caused by C. chauvoei, C. septicum, C. sordellii, C. perfringens type A, and/or C. novyi type A. Anti-C. chauvoei, anti-C. septicum, anti-C. sordellii and anti-C. novyi type A polyclonal antibodies were produced in rabbits and purified in a column of DEAE-cellulose. Aliquots of the antisera were conjugated with fluorescein isothiocyanate and the remaining was used for the streptavidin biotin peroxidase technique (SBPT). SBPT was standardized to detect C. chauvoei, C. septicum, C. sordellii and C. novyi type A in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues of guinea pigs. SBPT was compared to a fluorescent antibody technique (FAT). Sections and smears of muscle from inoculation area (MIA), heart, liver, spleen and kidney, were obtained for both SBPT and FAT. Cross-reactions between the different Clostridial species were not observed. C. chauvoei and C. septicum were detected in all specimens from the animals inoculated with these microorganisms, while only sections of muscle obtained from all the animals inoculated with C. sordellii and C. novyi type A were positive. The same results observed by the SBPT, were obtained on tissue smears of these microorganisms stained by the FAT. The results indicate that SBPT is suitable for detection of C. chauvoei, C. septicum, C. sordellii and C. novyi type A in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues of guinea pigs. O carbúnculo sintomático é causado pelo Clostridium chauvoei, enquanto o edema maligno é causado pelo C. chauvoei, C. septicum, C. sordellii, C. perfringens tipo A, e/ou C. novyi tipo A. Corpos policlonais anti-C. chauvoei, anti-C. septicum, anti-C. sordellii and anti-C.novyi tipo A foram produzidos em coelhos e purificados em uma coluna de DEAE-celulose. Alíquotas das imunoglobulinas foram conjugadas com isotiocianato de fluoresceína e o restante foi usado na técnica de streptavidina biotina peroxidase (SBP). SBP foi padronizada para detectar C. chauvoei, C. septicum, C. sordellii e C. novyi tipo A em tecidos de cobaias fixados em formol e incluídos em parafina. A mesma foi comparada com a técnica de imunofluorescência direta (IFD). Secções e impressões do músculo da área de inoculação, coração, fígado, baço e rim, foram obtidas para ambas as técnicas. Nenhuma reação cruzada foi observada quando tecidos inoculados com outras espécies de Clostridia foram tratadas com esses quatro anticorpos primários. C. chauvoei e C. septicum foram detectados em todos os espécimes provenientes dos animais inoculados com esses microrganismos, enquanto somente secções de músculo obtidas de todos os animais inoculados com C. sordellii e C. novyi tipo A foram positivas. Os mesmos resultados observados pela técnica de SBP, foram obtidos em impressões de tecidos desses microrganismos corados pela IFD. Os resultados indicam que a técnica de SBP permite a detecção de C. chauvoei, C. septicum, C. sordellii e C. novyi tipo A em tecidos de cobaias fixados em formol e incluídos em parafina.
Bibliography:	10.1590/S0100-736X2005000100002 http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0100-736X2005000100002
ISSN:	0100-736X 0100-736X
DOI:	10.1590/s0100-736x2005000100002