Biochemistry of Staphylococcus Aureus Adhesins: Identification of a new Vitronectin Binding Protein on Staphylococcus Aureus
O número de casos de infeções por Staphylococcus aureus tende a crescer a cada ano. Porém, o inverso acontece quando se observa os níveis de eficácia dos antibióticos. Embora tenha havido muito progresso científico acerca dos fatores de virulência responsáveis pela proteção desta bactéria das defesa...
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| Format: | Dissertation |
| Language: | English |
| Published: |
ProQuest Dissertations & Theses
01-01-2019
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| Summary: | O número de casos de infeções por Staphylococcus aureus tende a crescer a cada ano. Porém, o inverso acontece quando se observa os níveis de eficácia dos antibióticos. Embora tenha havido muito progresso científico acerca dos fatores de virulência responsáveis pela proteção desta bactéria das defesas do ser humano, ainda existem algumas conexões desconhecidas entre Staphylococcus aureus e o hospedeiro. Este estudo teve como objetivo investigar a capacidade de IsdB, uma proteína presente na parede celular de Staphylococcus aureus, de se ligar à vitronectina, uma proteína humana presente no sangue e na matriz extracelular.Como não há muita informação disponível sobre IsdB na literatura, este trabalho teve como um dos seus objetivos tentar perceber quais as condições ideias para a expressão desta proteína, uma proteína que pertence à família NEAT. Para o efeito células de S. aureus foram crescidas em diferentes meios de cultura e em diferentes estadios de crescimento e analisada a produção de IsdB por SDS-PAGE e western blot. A pesquisa mostrou que a expressão de IsdB é mais alta em meios pobres em ferro e muito mais evidente na fase estacionária do crescimento bacteriano do que na fase exponencial. Este resultado foi confirmado por avaliação da transcrição do gene que codifica para IsdB, utilizando a técnica RT-qPCR. Foi demonstrado que a produção de IsdB começa somente após a fase exponencial, sugerindo um papel importante na virulência do Staphylococcus aureus, pelo que deve ser estudado como um potencial alvo para possíveis medicamentos preventivos.Neste trabalho, foi ainda demonstrada, através de técnicas de ELISA, a existência de ligação entre IsdB e a vitronectina. Os dados obtidos revelaram uma constante de dissociação de 9,6nM e um nível de saturação dos recetores IsdB ao serem adicionados 250ng de Vn por poço. As experiências realizadas na presença de diferentes concentrações de NaCl, sugerem que esta ligação é dependente de NaCl, sendo que a ligação IsdB-Vn é inversamente proporcional à quantidade presente do sal. Com base nestes resultados, sugere-se que mais estudos sejam realizados para entender o mecanismo desta relação entre NaCl, IsdB e vitronectina. |
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| ISBN: | 9798342312981 |