一种寨卡病毒富集检测方法的性能评价

一种寨卡病毒富集检测方法的性能评价

R373; 目的 对一种无需核酸提取纯化的寨卡病毒实时荧光定量反转录PCR检测方法的性能进行评价.方法 该检测方法基于实时荧光定量反转录PCR技术,样本处理采用病毒富集法:取100～200μL待测样本,加入112～224μL样本处理液Ⅰ,5～10μL样本处理液Ⅱ,混匀后进行离心富集(12000 r/min,离心半径8.6 cm,离心5 min).离心后弃上清液,加入20μL复溶缓冲液重悬沉淀;取10μL重悬液,加入50μL PCR反应液上机检测.从定量检测下限、交叉反应、抗干扰性、精密度方面评价该检测方法的性能.收集北京协和医院检验科临床样本(血清、尿液、唾液样本),随机选取约1/5构建寨卡病...

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Published in:协和医学杂志 Vol. 13; no. 3; pp. 455 - 460
Main Authors: 李阿茜, 孔令君, 刘洋, 伊洁, 李川, 梁米芳, 窦亚玲
Format: Journal Article
Language:Chinese
Published: 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒性出血热室,北京102206%中国医学科学院北京协和医院检验科,北京100730 2022
Subjects:
性能评价
寨卡病毒
病毒富集法
快速检测
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Description
Summary:R373; 目的 对一种无需核酸提取纯化的寨卡病毒实时荧光定量反转录PCR检测方法的性能进行评价.方法 该检测方法基于实时荧光定量反转录PCR技术,样本处理采用病毒富集法:取100～200μL待测样本,加入112～224μL样本处理液Ⅰ,5～10μL样本处理液Ⅱ,混匀后进行离心富集(12000 r/min,离心半径8.6 cm,离心5 min).离心后弃上清液,加入20μL复溶缓冲液重悬沉淀;取10μL重悬液,加入50μL PCR反应液上机检测.从定量检测下限、交叉反应、抗干扰性、精密度方面评价该检测方法的性能.收集北京协和医院检验科临床样本(血清、尿液、唾液样本),随机选取约1/5构建寨卡病毒感染模拟临床样本,进一步评定该检测方法的性能.结果 该检测方法对MR766、ZKC2/2016毒株的检测下限均为101半数组织培养感染剂量(50％tissue culture infective dose,TCID50)/mL;对17种常见虫媒病原体检测结果均为阴性,无交叉反应发生;潜在干扰物质胆红素(15 mg/L)、血红蛋白(100 mg/L)、甘油三酯(2000 mg/L)、IgG(37.5 g/L)和EDTA-Na2(2.5 g/L)对其检测结果无干扰;检测低、中、高浓度寨卡病毒的批次内和批次间Ct值变异系数均<10％,精密度良好.共收集344份北京协和医院检验科临床样本,其中构建寨卡病毒感染模拟临床样本73份.采用该检测方法对344份样本进行检测,结果均与实际相符,无假阳性和假阴性.结论 寨卡病毒简单富集后再检测的方法特异性高、重复性好,检测结果不受干扰物质的影响,检测下限满足临床需求,且操作简便,但应用效果仍需在真实临床样本中进一步验证.
ISSN:1674-9081
DOI:10.12290/xhyxzz.2021-0357