完全性肺静脉异位引流潜在致病基因PDX1突变对其基因功能的影响

R725.4; 目的·采用全外显子测序技术筛查完全性肺静脉异位引流(total anomalous pulmonary venous connection,TAPVC)的可能致病基因,并对其功能进行验证.方法·选择2014-2019年在上海交通大学医学院附属新华医院及上海儿童医学中心确诊的100例TAPVC患儿(患儿组)以及120例健康儿童(对照组)为研究对象.收集2组儿童的血液样本,抽提全血基因组DNA并行外显子测序,以筛查TAPVC的潜在致病基因.通过Mutation Taster、SIFT、PolyPhen-2网站筛选致病基因的有害突变位点,并行Sanger测序.构建PDX1野生型(野生...

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Published in:	上海交通大学学报（医学版） Vol. 43; no. 10; pp. 1219 - 1226
Main Authors:	冯炜琦, 张琪, 吴逸卓, 鲁亚南, 于昱
Format:	Journal Article
Language:	Chinese
Published:	上海交通大学医学院附属新华医院心血管发育与再生医学研究所,上海 200092 01-10-2023
Subjects:	完全性肺静脉异位引流 SOX17 PDX1 人脐静脉内皮细胞 human umbilical vein endothelial cell(HUVEC) 错义突变 total anomalous pulmonary venous connection(TAPVC) missense mutation
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Summary:	R725.4; 目的·采用全外显子测序技术筛查完全性肺静脉异位引流(total anomalous pulmonary venous connection,TAPVC)的可能致病基因,并对其功能进行验证.方法·选择2014-2019年在上海交通大学医学院附属新华医院及上海儿童医学中心确诊的100例TAPVC患儿(患儿组)以及120例健康儿童(对照组)为研究对象.收集2组儿童的血液样本,抽提全血基因组DNA并行外显子测序,以筛查TAPVC的潜在致病基因.通过Mutation Taster、SIFT、PolyPhen-2网站筛选致病基因的有害突变位点,并行Sanger测序.构建PDX1野生型(野生组)及突变型(突变组)质粒,转染入HUVEC细胞后,分别采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和蛋白质印迹法检测突变对PDX1的mRNA和蛋白水平的影响.采用STRING数据库进行蛋白与蛋白之间的相互作用分析,并采用qPCR研究PDX1调节的下游基因的表达.结果·在TAPVC患儿中发现致病基因为PDX1,Sanger测序显示该基因存在 2 个新发突变,即c.C237A(P33T)和c.C237G(P33A).与野生组相比,2个突变组(CA组、CG组)的PDX1 mRNA水平没有显著变化,但蛋白相对表达量有明显增加,即分别是野生组的2.9倍和3.4倍(P=0.000,P=0.001).蛋白质相互作用分析的结果显示,PDX1与SOX17相关联;且qPCR结果显示,PDX1过表达可下调HUVEC细胞中SOX17的表达.结论·PDX1的2个新发错义突变可影响其转录后翻译,且PDX1可能是通过调控SOX17来参与TAPVC的发生与发展.
ISSN:	1674-8115
DOI:	10.3969/j.issn.1674-8115.2023.10.001