nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株抑制消减cDNA文库的构建
背景与目的已有的研究表明,nm23-H1基因是一个重要的肺癌转移抑制基因,为了筛选与该基因表达相关的差异表达基因,本研究拟构建nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株(L9981和L9981-nm23-H1)差异表达基因的抑制消减cDNA文库,为进一步筛选、克隆与nm23-H1转移相关的基因奠定基础。方法利用抑制消减杂交(suppressive subtractive hybridization,SSH)技术构建nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株(L9981和L9981-nm23-H1)间差异表达基因的正向和反向消减cDNA文库,经蓝白菌落筛选克隆,并PCR反应鉴定。结果成功构建...
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Published in: | Zhongguo fei ai za zhi Vol. 11; no. 4; pp. 482 - 488 |
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Main Author: | |
Format: | Journal Article |
Language: | Chinese |
Published: |
四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室,成都,610041%四川大学华西医院肿瘤中心,成都,610041%天津医科大学总医院天津市肺癌研究所,天津市肺癌转移与肿瘤微环境重点实验室,天津,300052
2008
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Summary: | 背景与目的已有的研究表明,nm23-H1基因是一个重要的肺癌转移抑制基因,为了筛选与该基因表达相关的差异表达基因,本研究拟构建nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株(L9981和L9981-nm23-H1)差异表达基因的抑制消减cDNA文库,为进一步筛选、克隆与nm23-H1转移相关的基因奠定基础。方法利用抑制消减杂交(suppressive subtractive hybridization,SSH)技术构建nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株(L9981和L9981-nm23-H1)间差异表达基因的正向和反向消减cDNA文库,经蓝白菌落筛选克隆,并PCR反应鉴定。结果成功构建了该两株细胞株差异表达基因的正向和反向消减cDNA文库。经蓝白菌落筛选,正向消减文库总共获得约300个白斑克隆,反向消减文库总共获得约400个白斑克隆,从正反向消减文库中各挑选96个克隆进行PCR扩增检测是否有插入片段,结果显示在挑选的正向文库中有84个克隆有插入片段,反向文库中有83个克隆有插入片段,其片段大小范围为(300-750)bp。结论抑制消减杂交是克隆差异表达基因的有效方法,我们应用SSH法和T/A克隆技术成... |
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Bibliography: | Lung neoplasms nm23-H1 gene Suppression subtractive hybridization cDNA library Metastatic-related gene R734.2 12-1395/R |
ISSN: | 1009-3419 1999-6187 |
DOI: | 10.3779/j.issn.1009-3419.2008.04.020 |